蛋白質印跡法的含量測定方法說明

發布日期： 2023-10-29

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蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。

1、標準曲線的制作

（1）從－20℃將1mg/ml BSA取出，室溫融化后備用。

（2）將1.5ml離心管取18個，3個一組，分別標記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。

（3）根據下面的表格將各種試劑加入到各管中。

（4）混勻后，室溫放置2分鐘，在生物分光光度計（Bio－Photometer，Eppentoff）上比色分析。

2、樣品蛋白含量的檢測

（1）取1.5ml離心管足夠多，將1ml4℃儲存的考馬斯亮藍溶液分別加入到每個離心管中，在室溫下放置30分鐘以后，就能夠被用來對蛋白進行檢測。

（2）將100ul 0.15mol/L NaCl溶液加入到取出的一管考馬斯亮藍溶液中，混勻放置2min中，就能夠作為空白樣品，在比色杯中倒入空白樣品，在做好標準曲線的程序下按blank對空白樣品進行檢測。

（3）將空白樣品棄掉，比色杯使用無水乙醇清洗2次（每次0.5mL），再將其使用無菌水洗一次。

（4）將95ul 0.15mol/L NaCl加入到取出的一管考馬斯亮藍溶液中，混勻后靜置2min，往扣干的比色杯中倒入按sample鍵對樣品進行檢測。

蛋白印跡儀被廣泛應用于臨床診斷領域，如篩選和確診引起感染性疾病的不同致病源（如病毒或細菌），以及過敏原鑒定。全自動蛋白印跡儀能將蛋白印跡處理中的所有關鍵步驟自動化，尤其是繁瑣的清洗和孵育步驟。

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